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為空間蛋白組學技術的發(fā)展提供強有力工具
空間蛋白組學被評為Nature Methods 2024年度方法。FluoXpert? 多重免疫熒光技術(multiplexed immunofluorescence, mIF)基于循環(huán)間接免疫熒光染色原理,搭配使用多重免疫熒光試劑套裝,可檢測多達24個蛋白標記物,這為空間蛋白組學技術的發(fā)展提供了強有力的工具。mIF利用不同的宿主物種一抗特異性結(jié)合抗原,再通過偶聯(lián)熒光團的宿主特異性二抗檢測每種抗體,通過抗體染色、信號移除和重新染色的迭代過程實現(xiàn)高達24蛋白檢測,最終呈現(xiàn)同一個樣本單細胞水平、亞細胞分辨率的空間蛋白圖譜。mIF的發(fā)展有助于深入理解蛋白質(zhì)在細胞內(nèi)功能和相互作用,識別功能相關的單細胞狀態(tài),促進基礎和臨床轉(zhuǎn)化的研究。
通過染色-拍照-洗脫多輪循環(huán),實現(xiàn)不同種類目標蛋白多重免疫熒光測定?;诳乖贵w特異性結(jié)合染色,加上先進的光路系統(tǒng)、圖像拼接算法,保證極高的空間分辨率圖像的同時,實現(xiàn)組織切片精準定位,描繪出蛋白質(zhì)空間表達信息。溫和洗脫技術保證低組織損傷,并保證新一輪抗原-抗體結(jié)合,可實現(xiàn)20+抗體染拍循環(huán)。
兼容傳統(tǒng)切片的制備流程,以石蠟切片為例,組織染色前處理,包括石蠟組織的切片制備、脫蠟、水化,接著進行載片裝配、試劑針從試劑盒吸取不同孔位試劑實現(xiàn)不同抗體染色、流體泵流過裝有組織切片的芯片載物臺實現(xiàn)換液洗脫,通過不同腳本實現(xiàn)多輪染色、拍照、洗脫自動化循環(huán)流程。
在生物學的各個領域中,許多研究問題只能通過同時觀察單個細胞內(nèi)蛋白質(zhì)的表達豐度和分布來解決。FluoXpert? 多重免疫熒光技術(mIF)使得在單個細胞中識別20+蛋白成為可能,有助于認識生物醫(yī)學中的組織微環(huán)境和細胞生態(tài)系統(tǒng)。目前mIF已廣泛應用于研究目標組織的細胞組成、功能表型、細胞間相互作用,在描繪信號通路研究、腫瘤免疫微環(huán)境、預后標志物評價以及伴隨診斷開發(fā)等方面具有較大的前景。
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