今年4月份，華大智造正式推出MGISEQ-2000RS FluoXpert（以下簡稱“FluoXpert”）多組學(xué)分析儀。這也是中國首款具有自主知識產(chǎn)權(quán)、集成了病理切片染拍功能和測序功能的基因測序儀，也是一臺能夠做病理組織染拍空間蛋白組學(xué)的測序儀。為滿足醫(yī)學(xué)科研用戶在組織切片空間蛋白組學(xué)研究中的高標(biāo)準(zhǔn)需求，華大智造全新推出搭配FluoXpert平臺使用的24色多重免疫熒光試劑套裝，可支持高達(dá)23個標(biāo)記物及細(xì)胞核的染色。
在傳統(tǒng)病理學(xué)和轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域，組織切片的蛋白表達(dá)分析主要依賴于蘇木精-伊紅染色（Hematoxylin-eosin staining，H&E）和免疫組織化學(xué)（Immunohistochemistry，IHC）。然而，H&E染色僅限于提供定性結(jié)果，傳統(tǒng)IHC染色則無法在單張組織切片上進(jìn)行多個蛋白表達(dá)的檢測。
多重免疫熒光技術(shù)（Multiplex Immunofluorescence，mIF）打破了這一局限，它能夠在一張切片上同時檢測多個目標(biāo)蛋白，保留了寶貴的空間信息，這對于深入理解組織微環(huán)境和細(xì)胞間相互作用至關(guān)重要。多重免疫熒光揭示了不同細(xì)胞群之間的空間位置關(guān)系，可進(jìn)一步提升病人的預(yù)后評估，對靶向藥物的開發(fā)、空間標(biāo)志物的發(fā)現(xiàn)有著重要的作用。
FluoXpert基于目標(biāo)抗原&一抗&熒光二抗特異性結(jié)合的生化原理，通過其染色-拍照-洗脫的多輪循環(huán)流程，實現(xiàn)了對單張切片的多重目標(biāo)蛋白檢測。其精密的機械設(shè)計、先進(jìn)的流體控制系統(tǒng)、獨特的生化工藝和高效的光路系統(tǒng)共同確保了檢測的高靈敏度和組織切片多重標(biāo)記物空間定位的準(zhǔn)確性。
FluoXpert染色試劑盒上新
實現(xiàn)高達(dá)20+靶標(biāo)蛋白染色
此次升級的24色多重免疫熒光試劑套裝——FluoXpert多重免疫熒光試劑套裝（SS 24P/ SL 24P/ DL 24P），套裝同樣可選擇性搭配三種不同型號的載片（SS/SL/DL），支持高達(dá)23個標(biāo)記物及細(xì)胞核的染色。該試劑套裝簡單易用，可支持FFPE石蠟切片和新鮮冷凍FF切片，兼容市售一抗，用戶無需對一抗進(jìn)行特殊的偶聯(lián)處理，稀釋后加入試劑盒中即可上機進(jìn)行全自動的多重染色，24色染色流程可在12小時內(nèi)完成，極大地簡化實驗手動操作流程，提高科研效率。
不同于傳統(tǒng)的多重免疫熒光技術(shù)（Tyramide signal amplification，TSA），F(xiàn)luoXpert試劑盒每次可進(jìn)行兩種蛋白的染色，抗體上所帶的熒光信號串?dāng)_少，信號更準(zhǔn)確。而TSA方式針對不同目標(biāo)蛋白需要用不同的熒光基團(tuán)進(jìn)行信號標(biāo)記，多重染色后切片上同時存在多種熒光染料（如圖1.1），后期需要通過光譜拆分還原不同的熒光信號，顏色越多，光譜拆分難度越大。使用FluoXpert可以有效避免TSA方法帶來的光譜串?dāng)_問題（圖1.2），輕松達(dá)到20+目標(biāo)蛋白的染色效果。
圖1.1：基于TSA的mIHC染色原理，9色多重免疫熒光譜圖
圖1.2：FluoXpert多重免疫熒光使用的雙熒光通道
四大黑科技集聚
FluoXpert 24-plex試劑盒
01 集成高效自發(fā)熒光去除試劑，有效去除組織切片的自發(fā)熒光信號；圖2（a-b）
02 載片鍍層處理，金屬鍍層使激光進(jìn)行二次反射，激發(fā)效率加倍；圖2（c）
03 抗體增強劑，有效提高抗體結(jié)合效率，進(jìn)而節(jié)省一抗用量及孵育時間
04 高效溫和的洗脫技術(shù)，多達(dá)19輪循環(huán)染色，信號強度波動小于7%, 圖3
圖2. (a-b) 鼠腦石蠟切片在試劑盒自發(fā)熒光試劑作用下，組織本身自發(fā)熒光可降低3-5倍;(c) 載片鍍層作用下使激發(fā)效率增強～150%
同一切片經(jīng)過19輪染色結(jié)果表明多輪染色信號穩(wěn)定，且可精準(zhǔn)實現(xiàn)多輪的圖像對齊
圖3. 同一切片經(jīng)過19個循環(huán)染色后同一標(biāo)記物信號波動小于7%
不同樣本類型驗證
FluoXpert實測數(shù)據(jù)高效可靠
1.樣本類型：扁桃體石蠟切片染色重數(shù)：22重標(biāo)記物+核染色研究領(lǐng)域：抗體Panel開發(fā)測評機構(gòu)：Dr. Joe Yeong（新加坡）實測結(jié)論：FluoXpert平臺可實現(xiàn)20+蛋白的染色，各marker間信號串?dāng)_少，可精確揭示不同細(xì)胞群體的空間分布，為空間蛋白組學(xué)研究提供高效可靠的技術(shù)平臺。
實測樣本全圖預(yù)覽，查看ROI圖
2.樣本類型：食管癌石蠟切片染色重數(shù)：9重標(biāo)記物+核染色研究領(lǐng)域：腫瘤免疫測評機構(gòu)：華南某用戶實測結(jié)論：FluoXpert的mIF染拍功能可與單細(xì)胞測序、時空組學(xué)結(jié)合，實現(xiàn)基因及蛋白層面的多組學(xué)分析，為腫瘤免疫微環(huán)境深入研究提供新思路。
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3.樣本類型：食管癌石蠟切片染色重數(shù)：15重標(biāo)記物+核染色研究領(lǐng)域：抗體開發(fā)測評機構(gòu)：西南某用戶實測結(jié)論：FluoXpert多重免疫熒光自動染拍功能為抗體開發(fā)提供了高效驗證工具。
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4.樣本類型：人子宮內(nèi)膜冷凍切片染色重數(shù)：13重標(biāo)記物+核染色研究領(lǐng)域：妊娠過程分子機制研究 測評機構(gòu)：華南某用戶實測結(jié)論：結(jié)果表明FluoXpert的多重免疫熒光染拍功能在冷凍切片上表現(xiàn)優(yōu)異，抗體染色特異性較高，細(xì)胞定位準(zhǔn)確，成像效果好，能很好的實現(xiàn)多種蛋白表達(dá)的共定位分析。
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5.樣本類型：植物愈傷組織石蠟切片染色重數(shù)：4重標(biāo)記物+核染色研究領(lǐng)域：植物再生的機制研究 測評機構(gòu)：華東某用戶實測結(jié)論：FluoXpert 樣本兼容性高，且一抗無需特殊偶聯(lián)處理，使得我們的植物樣本多重蛋白染色在FluoXpert平臺得以實現(xiàn)，為植物再生的機制研究擴寬思路。
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